作者inveigh (invection )
看板Biotech
标题[求救] real time PCR 前的RNA preparation
时间Fri Sep 11 00:41:46 2009
我的实验遇到一些问题想请教各位. 以前都是用invitrogen RNA KIT抽RNA.然後会跑胶
看一下RNA quality.结果都还好,都看的到18s和28s两条bands.
但最近要收的sample量很少.所以RNA就用传统方式抽,并且有加入glycogen去pull down RNA,
不过遇到一些问题.
1. 跑胶时,除了那18,28S 两条bands,还看到<100 bp处有一团,
不知道是不是degraded RNA??
2.因为没有用DNaseI, 所以想说直接用RNA去跑PCR(18S primer),结果和以cDNA为template
的结果一样,在100bp处可以看到一条BAND. 所以这代表有genomic DNA污染吗?
可是如果primer是span intron的,应该PCR产物会很大吧?? 所以它有可能是??
所以我想说会不会是我在离心取上清液时,有吸到一些interphase的gDNA?可是又有人跟我说,
就算我放弃很多接近interphase的上清液,仍然不可能避免gDNA的污染??
3. 那如果我将上清液加入glycogen後, 可以再去过invitrogen的抽RNA的column吗?
因为还是习惯用KIT,用ISP抽一直抽不好>.<
希望各位能多多分享意见.谢谢
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◆ From: 61.230.128.160
※ 编辑: inveigh 来自: 61.230.128.160 (09/11 00:44)
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