作者takkyu (心情真好~)
看板Biotech
标题[求救] 免疫萤光染色
时间Thu Aug 27 23:42:36 2009
各位大家好，想请问大家我这样的染色步骤是否可行
因为出来的结果有时候成功有时候又失败
以染NeuN为例好了 [Chemicon, MAB377, Ms]
1. Slide 56~60度西 x 15分钟
2. Slide 浸泡 xylene 5分钟 x 2 --> 100%酒精 3分钟 --> 95% 酒精 3分钟
--> 80% 酒精 3分钟 --> H2O 30秒
3. PBS wash 5分钟
4. Blocking 2小时 [PBS + 10% Normal goat serum + 1% BSA + 1% Triton X-100]
5. 不wash 将blocking solution敲乾净
6. 加入一抗 [PBS + 2% Normal goat serum + 0.2% Triton x-100] overnight
7. Wash PBS 5分钟 x 2
8. 加入萤光二抗 [避光，配方同一抗] (invitrogen Alexa Fluor系列)
9. Wash PBS 5分钟 x 2 [避光]
10. 滴anti-fade 封片 [避光]
想询问各为这样的protocol是否可行，我在做的时候有确定不是因为片子乾掉
而造成失败~
另外想请问各位的是PBS配方
我们家的是 0.01M PBS(2L): 1.8 NaCl; 0.432 NaH2PO4; 2.16 Na2HPO4; PH7.4
我另外有要到
1. (1L)dH2O 800ml; NaCl 8g; KCl 1.2g; Na2HPO4 1.44g; KH2PO4 0.24g pH7.4
2. 0.1M PBS(2L): 18.4g Na2HPO4; 17.5g NaCl; 5.04g NaH2PO4． H2O; 0.4g KCl
这两种，想请问这两种的差别是有听说1.是用在活细胞 2.就不知道了；哪种配方
是比较适合用在免疫染色上(组织)
先谢谢各位了，若改善後有结果会在上来跟各位分享步骤~
祝各位 实验顺利!!
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◆ From: 125.225.149.70
※ 编辑: takkyu 来自: 125.225.149.70 (08/27 23:43)
1F：→ takkyu:另外想请问双染的话需要注意哪些地方呢? 08/28 00:10
2F：→ humwang:没有做antigen retrival, antigen没暴露出来，当然没结果 08/30 19:07
3F：→ humwang:rehydration後用citric buffer做antigen retrival 08/30 19:09