作者s90034 (请勿拍打喂食！)
看板Biotech
标题[求救] western讯号强弱不同
时间Thu Aug 20 14:35:36 2009
因为老板说要比较protein的量
因此要测B-actin的量
把之前压好的4片membrane拿出来wash(洗掉HRP)
之後按照一般程序
> 一抗(1:10000)室温1小时
> wash
> 二抗(1:5000)室温2小时
> wash
> HRP
> 压片
但是压出来後却有很大的问题......
4片有3片看起来很正常(至少band都够粗够黑)
但其中一片band却很淡
想说把压片时间拉长看看
结果其他三片更粗了...那一片却几乎看不到了囧
看一下之前压目标protein的片子
那一片看起来的确有比其他片淡一些
不过"肉眼"看来应该没差这麽多@@
因为是整片10条band都很淡，所以应该不会是个别sample的问题
而blocking、一抗、二抗都是先配在同一管再分成4份
应该也不会是这些原因
我在想因为我们家用的是湿式transfer
放法是: 正 菜瓜布>3M3张>membrane>gel>3M3张>菜瓜布 负
因为菜瓜布用久了每片厚度不一
虽然觉得因为这样造成transfer效率的问题
但是这可能会造成这麽大的差异吗= =?
请问可能还会有什麽原因会造成如此问题?
而且HRP压越久反而越看不到会是什麽原因呢?
感谢O_Q
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 211.76.175.171
1F：推 ooooh:signal太强 decay过快 08/20 21:11
2F：→ s90034:可是同样的sample却是相反的结果...一片愈强一愈弱弱~"~ 08/20 22:51