作者apingping (go where)
看板Biotech
标题[求救] real-time RT-PCR 定量RNA
时间Sat Aug 15 17:40:58 2009
借朋友哀低PO的...
最近要做病毒RNA的定量 但遇到了一些瓶颈....
请各位高手能给予指教
1. 使用的引子是参考paper的，但做出来的slope都在4以上(R=0.99~1)，这样
PCR效率就会降低，另外还有primer dimer在低病毒量会出现的问题，那
这样的方法还适合用来做绝对定量吗?? (detection limite 会不会不够敏感??)
2. 检量线的部分我查过paper，大部分是用in vitro transcription的方式制备
RNA 来当standard，有人试过直接抽病毒RNA当standard吗??(若是以抽病毒RNA kit
去抽的话，是不是就一定不会抽到细胞本身的RNA)
3. TOPO-T-vector和pGEM-TEasy vector哪一种比较好做?
不知道大家看不看的懂我想问的问题@@"
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