最近取大鼠的肌肉组织,均质(homogenize)後定量进行western看蛋白质表现 电泳时遇到一个问题, sample很浓稠,要load进well的时候好像"思乐冰"一样勾勾的, 电泳後胶的well上也有一点点残留物(不知道是什麽) 洗片後也是白皙皙 QQ 感觉好像蛋白质都没有 被分离开or依然卡在well上 一样...Q皿Q 请问这是发生什麽事? 会是什麽原因? 有什麽改善方法吗? 谢谢 ====================================================================== 我在均质的时候就直接将组织放在1.5cc的eppendorf加入RIPA,然後就直接均质, 4度C 13000转 10分钟 离心後取上清液定量,-20度保存 上清液的颜色是有一点那种淡淡的血水那种感觉............ (有点像猪肉解冻後低下来的血水那样) (这情形让我很不安...这是正常状况吗?) 喔...对了...我大约是0.2mg左右的tissue配300ul的RIPA下去均质, 定量後蛋白质量接近 1ug/ul (大约0.9X左右) western时,蛋白质取的量是 40ug/well 之前有试过,将其中一支用不到的sample死马当活马医: 我在电泳前又在sample加入RIPA稀释,就不会这样勾勾的, 不过洗片依然"白帅帅" T皿T 我在想应该是RIPA把蛋白质给稀释过头了,所以表现量低到侦测不到... 也试过homogenize後再用sonication震一次, 但效果也没有多好... 是我sonicate震太小吗? 或是? 找了些资料也有爬过,不过没看过类似我这样的状况... 做实验遇到这种"前无古人後无来者"... 实在是 好讨厌的感觉呀~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~>"< --

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