作者nzj (edger)
看板Biotech
标题Re: [求救] 有关protein纯化
时间Fri Aug 7 15:54:21 2009
※ 引述《a343408065 (寂寞东京铁塔)》之铭言：
: 最近我在纯化protein时一直有无法denature完全的问题
: 我们纯化的protein是inclution body
: 我们目前是用6M urea去denature 破菌後的离心pellet
: denature 两小时後再离心取上清液去通Nico column
: denature时也确实有混合均匀
: 但跑SDS-PAGE出来的结果
: 还是发现有很多protein残留在不要的pelet里
: 想请问真的是需要提高浓度才能完全纯化出我们要的蛋白吗
可以用8M urea或guanidium chloride试试看
不过不太懂的是,为何混合均匀还会有pellet?
记得以前做的时候,都是慢慢将pellet suspension慢慢滴入
6M urea中,搅拌到透明状,应该不会有pellet才是,会不会urea体积
用的太少,最後蛋白质的浓度为多少呢?有的protein的最後浓度
为0.5 mg/mL是确定可以溶的。也许可以试着控制蛋白质溶在urea的量,
或许可以增加溶解度。
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