作者kaifish (喔.....................)
看板Biotech
标题Re: [求救] 请问转基因鼠怎麽分wt和mutant?
时间Fri Aug 7 02:07:41 2009
※ 引述《hickory (C'est la vie)》之铭言:
: 请问一下板上有在做老鼠的学长姐们 小弟念到一篇论文,用老鼠来做
: MECP2基因缺失的实验。这篇文在材料方法中提到
: All of the mice used in these experiments were generated by crossing
: heterozygous female Mecp2 Flox/+ mice that had been backcrossed to
: 129S6/SvEvTac for at least five generations to male mice on either a pure
: FVB/N background or male mice on a pure C57BL/6J background to generate
: isogenic F1 animals. Only male animals were used for all the experiments
: listed with WT littermate males serving as the controls.
: 我自己对这一段的理解是 他用 129S6 ,基因型 XX 的母鼠 和
: FVBN、C57BL/6J 两种品系的公鼠去交配,变成 XX XY
: (此基因X-Link,X代表某基因被Knokout,X是正常性染色体)
: 生出子代的公鼠有两种,一种是 XY ,一种 XY
: XY 拿来做实验;XY当作 wild type control
: 但我的问题是,实验者怎麽知道这只老鼠是 XY 还是 XY ?
: 想了很久,不得其解,来版上请学长姐不吝赐教
: 附上原文 http://www.badongo.com/file/15942038
从内文看来,floxed allele仍保留neo cassette
所以 WT 的 X染色体与floxed X染色体之间,长度就有差异(neo cassette约 2 Kb)
因此只要切小鼠的尾巴抽DNA
利用PCR或是Southern blot就可以看出小鼠的 X 染色体是WT 或 floxed allele
--
我不想在球场上当一个没用的人
也许我真得不是很厉害
再练下去也只有这样子...
可是.......我就是会认真地去练习
赌赌看明天会不会变强一点...
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.229.71.125
1F:推 boblu:实作多是用 PCR 08/07 08:28
2F:推 hickory:感谢您! 非常清楚! 08/07 08:47
3F:→ schmitt:PCR+1 08/07 17:45