※ 引述《pytforyou ()》之铭言： : 大家好 : 我最近做的 Western Blotting : Band 都会被挤压到 : 而且大都在中间区域的位置 : 不论是大分子量或是小分子量 : 我们实验室从做胶到 transfer 都是用 Bio-Rad 的系统 : 图片：http://www.wretch.cc/album/album.php?id=popopaul34&book=5 : 这张图我秀的算是大分子量的位置 : 大约是在 55kDa 的位置 : 同一张 Blot 大约 25kDa 的位置 : 也有相同的情形发生 : 但是更为严重一些 : (24kDa 那边从 lane 2 到 lane 7 : 都是一样的状况) : 我想问的问题是 : 在 lane 4 和 lane 5 的位置 : 发生了什麽事情？ : 我跟实验室的人讨论过 : 有人觉得是大泡泡的影响 : 有人觉得是被挤压到 : 我个人觉得不是泡泡 : 因为我在做 transfer 的时候 : 都很仔细的看 : 而且我也有请别人帮我确定有没有泡泡 : 所以我觉得应该不是泡泡的影响 : 不过挤压到的话 : 我也觉得怪怪的 : 因为我都挑很松的那种 transfer casette : 我一定不会硬挤进去 : 另外 : 我问过一个 sales : 她说有可能是胶没做好 : 她说有可能是因为胶凝的太快 : 而且胶做的不均匀 : 於是我按照板上其他大大的做法 : APS 和 TEMED 的比例为 10:1 : 全部配好之後 : 我用 droper 加到玻璃里面 : 大约要等 30 分钟才会凝固 : 以上是 Resolving gel (下胶)的部份 : (我觉得胶做的还满漂亮的 : 因为下胶和上胶中间的那条线很直 : 不过纯属感觉) : 我们实验室其他人做 : 大都不会遇到这样的问题 : 不过我个人遇到这样的问题机率很高 : 基本上每次做两片就至少一片会有这样的状况 : 昨天做四片有三片都这样 : 而这样的问题困扰我许久了 : 因此想问问看大家的意见 : 看看是否能够改善 : 麻烦大家帮我想想了 : 如果有任何需要的资讯 : 只要在不损害实验室权利的状况下 : 我将不吝提供 : 感谢各位了 : 以方便板友帮您追踪问题 -------------------------------上次问题的分隔线----------------------------- 首先要先感谢一下板上的强者们 因为我的问题解决了 我後来在做 transfer 的时候 在 transfer tank 中加了一个小小的 stir bar 接着，一边快速旋转着 stir bar，一边 transfer 然後所有的问题都解决了 现在每一条 band 都美美的 真的是很感谢大家给我的意见 可是我又有疑问了 为什麽大家都用一样的方法做实验 可是却只有我会有 buffer 温度(浓度)不均匀的问题呢？ 是我做实验的习惯问题？ 还是我的手气比较不好？ 想请大家再给我一些指教！ 感恩～感恩～ --

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