※ 引述《chl20020933 (chl20020933)》之铭言： : ※ 引述《yashi (我要天天快乐快乐)》之铭言： : 昨天看到已经很晚了 所以到现在才回 : : 先谢谢很多人愿意帮我一起厘清问题 : : 其实我个人比较倾向是buffer或是sample的问题哎 : 同s大表示 如果是这些问题 你的marker不会那麽清楚 : : 因为我这个实验重覆满多次了 : : 条件都是一样的 1%的胶100V跑40min : : 不过之前都没有这方面的问题 : : 而且这次的sample是real-time完的产物 : : 而我同时也有跑melting curve : : melting是一个很漂亮的peak : 这我没有做很多 : 不确定real-time侦测到的萤光 比实际的"specific" PCR product是不是绝对正确 : 也不知道是不是这原因 你们老师才要求你要跑GE 我们老师只觉得用melting curve看不出来 分子量 而且他喜欢"眼见为凭"的感觉 : 但是gel图看起来 不知道是背景 还是non-specific 的smear 嗯嗯 这点我也不确定是产物本身就不专一 还是胶让它smear 不过我还满相信melting curve的 : : 我p完的产物放在-20℃冰箱三天我就跑了 : : PCR的program也不太可能有人动到… : : 因为我们实验室就只有我疯狂的在跑real-time PCR : : agrose我也都用一样的 : : 附带一题 : : 我的这个照片是用 切胶片用的光箱+数位相机+滤镜照出来的 : : 所以可能照片跟照胶器照出来的 品质会差很多0rz... : : 还有我不太了解 所谓的well里面卡住的是template DNA是什麽意思…？？ : : 是代表我的template DNA加太多 所以反应不完全吗？ : 我会说template DNA卡在那边 因为看你的marker应该是100bp-3k的吧 : 所以上面残留的大小 应该是template DNA才对 : 然後看染色的结果 相对来说 背景那麽强 只有60bp的 band一定会看不到 : 另外 你的gel只有1% 以往我们要分50-500bp的band都用到3%的gel 可是我以前用相同条件跑 我觉得结果还ok哎！！ http://www.wretch.cc/album/show.php?i=yashihuang&b=17&f=1299448890&p=4 : 或是 5%的 poly-acrylamide gel : 1%跑 60bp 跑到下面都糊掉了(你可以看marker的100bp) : 片段又很小很难染色 所以什麽都看不到 : : 如果是这样的话可以从real-time PCR的curve或是melting curve看出来吗？ : : (我觉得如果template DNA很多的话 melting curve应该会很丑吧？？？) : : 最後 谢谢大家努力帮我解决！！ 谢谢^^ --

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