※ 引述《yashi (我要天天快乐快乐)》之铭言： : 标题: Re: [求救] DNA电泳 : 时间: Wed Jul 22 00:06:07 2009 : : ※ 引述《yashi (我要天天快乐快乐)》之铭言： : : 我是把real-time PCR做完的产物拿来跑电泳 : : 取15μL的sample加上3μl的dye : : 这次跑出来的sample是β-actin 大小大概是60bp : : PCR跑了40个cycle : : 胶片是1%的agrose gel : : buffer都是1× TBE buffer : : 我之前也是照着这个条件跑 : : 都有跑出结果来 : : 不过最近几次发现sample都卡在上面下不来… : : 但是marker却分得满漂亮的 : : 现在根本不知道问题出在哪里 : : 觉得很苦恼… : : 希望板上有高手可以帮我解决 : : 感激不尽！！！ : : http://www.wretch.cc/album/show.php?i=yashihuang&b=17&f=1299448889&p=3 : 先谢谢很多人愿意帮我一起厘清问题 : 其实我个人比较倾向是buffer或是sample的问题哎 : 因为我这个实验重覆满多次了 : 条件都是一样的 1%的胶100V跑40min : 不过之前都没有这方面的问题 : 而且这次的sample是real-time完的产物 : 而我同时也有跑melting curve : melting是一个很漂亮的peak : 我p完的产物放在-20℃冰箱三天我就跑了 : PCR的program也不太可能有人动到… : 因为我们实验室就只有我疯狂的在跑real-time PCR : agrose我也都用一样的 : 附带一题 : 我的这个照片是用 切胶片用的光箱+数位相机+滤镜照出来的 : 所以可能照片跟照胶器照出来的 品质会差很多0rz... : 还有我不太了解 所谓的well里面卡住的是template DNA是什麽意思…？？ : 是代表我的template DNA加太多 所以反应不完全吗？ : 如果是这样的话可以从real-time PCR的curve或是melting curve看出来吗？ : (我觉得如果template DNA很多的话 melting curve应该会很丑吧？？？) : 最後 谢谢大家努力帮我解决！！ : : -- :

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) : ◆ From: 61.229.148.140 : 推 seal0413:If your buffer has problem, your marker won't be 07/22 05:45 : → seal0413:showed clear. 07/22 05:49 : → seal0413:Maybe you should check your PCR reagent 07/22 06:11 : → seal0413:If PCR is ok, you will try real-time PCR!!! 07/22 06:13 ^^^^^^^^^^^^^^ 有点不了解s大说的意思 因为我的系统就是real-time PCR 只是老师想再跑胶而check size : → bobbygau:经过Melting curve後，dsDNA全被打开，很短时间内降温， 07/22 11:06 : → bobbygau:常常会乱黏而造成smear。我觉得可以不用跑胶了，不然就 07/22 11:08 : 真的假的………… ps我们老师一直逼我 → bobbygau:别做melting curve。SYBR Safe/Green染小片段效果不佳， 07/22 11:09 : → bobbygau:试试EtBr。 07/22 11:10 ？？？ 听不太懂b大的意思哎？？？ 我跑胶的染剂是用Genomics公司出的HealthView Nucleic Stain 它号称可以替代EtBr...... 但比较不毒.... 谢谢大家 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.23.86