作者yashi (我要天天快乐快乐)
看板Biotech
标题Re: [求救] DNA电泳
时间Wed Jul 22 00:06:07 2009
※ 引述《yashi (我要天天快乐快乐)》之铭言：
: 我是把real-time PCR做完的产物拿来跑电泳
: 取15μL的sample加上3μl的dye
: 这次跑出来的sample是β-actin 大小大概是60bp
: PCR跑了40个cycle
: 胶片是1%的agrose gel
: buffer都是1× TBE buffer
: 我之前也是照着这个条件跑
: 都有跑出结果来
: 不过最近几次发现sample都卡在上面下不来…
: 但是marker却分得满漂亮的
: 现在根本不知道问题出在哪里
: 觉得很苦恼…
: 希望板上有高手可以帮我解决
: 感激不尽！！！
: http://www.wretch.cc/album/show.php?i=yashihuang&b=17&f=1299448889&p=3
先谢谢很多人愿意帮我一起厘清问题
其实我个人比较倾向是buffer或是sample的问题哎
因为我这个实验重覆满多次了
条件都是一样的 1%的胶100V跑40min
不过之前都没有这方面的问题
而且这次的sample是real-time完的产物
而我同时也有跑melting curve
melting是一个很漂亮的peak
我p完的产物放在-20℃冰箱三天我就跑了
PCR的program也不太可能有人动到…
因为我们实验室就只有我疯狂的在跑real-time PCR
agrose我也都用一样的
附带一题
我的这个照片是用 切胶片用的光箱+数位相机+滤镜照出来的
所以可能照片跟照胶器照出来的 品质会差很多0rz...
还有我不太了解 所谓的well里面卡住的是template DNA是什麽意思…？？
是代表我的template DNA加太多 所以反应不完全吗？
如果是这样的话可以从real-time PCR的curve或是melting curve看出来吗？
(我觉得如果template DNA很多的话 melting curve应该会很丑吧？？？)
最後 谢谢大家努力帮我解决！！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.229.148.140
1F：推 seal0413:If your buffer has problem, your marker won't be 07/22 05:45
2F：→ seal0413:showed clear. 07/22 05:49
3F：→ seal0413:Maybe you should check your PCR reagent 07/22 06:11
4F：→ seal0413:If PCR is ok, you will try real-time PCR!!! 07/22 06:13
5F：→ bobbygau:经过Melting curve後，dsDNA全被打开，很短时间内降温， 07/22 11:06
6F：→ bobbygau:常常会乱黏而造成smear。我觉得可以不用跑胶了，不然就 07/22 11:08
7F：→ bobbygau:别做melting curve。SYBR Safe/Green染小片段效果不佳， 07/22 11:09
8F：→ bobbygau:试试EtBr。 07/22 11:10