作者seal0413 (seal)
看板Biotech
标题Re: [求救] Transwell invasion 求救
时间Tue Jul 21 22:17:15 2009
※ 引述《abbyyam (ㄟ逼)》之铭言:
: 想请问大家做invasion时的条件
: 我知道市面上有kit 是专门在做invasion的
: 很像已经铺好matrigel之类的东西
: anyway我们实验室是自己铺matrigel
: 但是目前有几个问题
: 1.就是我该使用多少matrigel?
: 我是用24-well plate 来做的
: 目前的protocal 是加30ul的matrigel 凝胶O/N
: 但是总是觉得非常难铺平,因为张力问题中间会凹下去
: 所以才想问说该加多少的量?
: 虽然即使凹下去但是离membrane还是有非常非常些微的距离啦
: 2.Matrigel与medium的比例?
: 我目前是用 matrigel:growth medium = 1:3
: 但是目前遇到的问题是
: 在实验当天在外槽加入medium,使insert的membrane回水并适应medium时
: (我是用30min~3hr)
: 会发现外槽的medium很像会渗入insert中
: 使得我的insert中内容物上升 (matrigel不知道是跑哪了= =" 应该是还在里面吧)
: 所以不知道我外槽的medium会不会跟内槽的matrigel溶在一起了
: 以上两个问题让我对我的实验结果有些怀疑
: 他们到底有没有在invasion呢??
: 有在做的人麻烦解答了> <
My condition: (24 well)
Coating: I have used 100 micro liters of matrigel to coat interior well
and then stood for 4 degree overnight.
After coating, remove matrigel (suction) and put cells to invade
(refer to your migration condition).
I consider that you can compare the result of invasion (coating or not)
to check the effect of your coating.
keep going!!!
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