作者bee921 (BEE)
看板Biotech
标题[求救] 可接Promoter之萤光质体!!
时间Fri Jul 10 20:41:38 2009
现在在做有关於Promoter方面的研究
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原本根据之前学长自己重新构筑的萤光质体设计带有 EcoRI及NcoI切位的primer
获得promoter序列後做了Restriction double digest
在学长构筑的质体(同样可以用酵素把他旧有的promoter切下，打算接我自己的)
但却发现自己先前没注意到还有一个EcoRI切位刚好完整的把EGFP切掉
也就是
-----EcoRI-旧Promoter-NcoI-EGFP-"EcoRI"-----(环状)
自己有试过用partial digest切过~没用的很好
(但每次都这样有点麻烦)
所以想徵求可接promoter的萤光质体
像是pmaxFP-yellow-PRL vector等
或是有好的解决方法
谢谢!
Orz
(有爬文看到突变序列产生新的切位或改变切位，想说还是先请教各位)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.84.225
1F：推 afunafun:promoter前面应该不只有一个切点 原PO可再查一下 07/10 21:05
2F：→ afunafun:若没有就先用EcoRI整段切下 接到其他质体上 07/10 21:07
3F：→ afunafun:做切点置换 增加切点总类 再送回原质体 07/10 21:09
4F：→ bee921:谢谢a大的指教~接质体增加切位是个好方法 07/12 13:52
5F：推 lucidol:将後面的RE切位以定点突变换掉使之为其他序列?? 07/16 18:14