※ 引述《FUSION87 (一起企都都轰阿)》之铭言： : 大家好 : 小弟的实验有点复杂.. : 大致上是将两种plasmid共同transform到BL21(DE3)中 : 他们分别是pET42-based及pACYC184-based的plasmid : 其中pET42搭载一个目标蛋白 : 而pACYC搭载三个目标蛋白 总共会表现4种target proteins : 我的目标是pACYC上的三个蛋白在表现後会对pET42所表现的蛋白进行後修饰... : 我要纯化被修饰的蛋白... : 由於这个pACYC184-based的plasmid是已经有人发表过的东西 : 所以应该是可以work的，同时我也利用别的plasmid去co-transform过确认他OK的 : 而我的pET42的蛋白 若是单独表现 也都可以纯化到大量的target protein : 只是当我在co-express的时候，pET42的表现量会大幅度的下降 : 下降到不像单一表现时那种很突出的band,就是虽然有 但是并没有特别多 : 目前已经测试过16、25、37度或是时间点上的差异测试 : 效果都不是很显着，IPTG的量上还正在测... : 只是在想说 在更改什麽条件下 会让蛋白的总产量增加?? : 因为似乎不管那种条件都会有一些蛋白跑到Inclusion body里.. : (不过不知道有没有可能是蛋白跑去把不溶的protein修饰了..) : 所以那就想说 使总产量增加的方法也可以... 想先问一下，那另外三种蛋白的表现量状况是怎样？ 如果另外三种很强，那你的重点就不是在IPTG这些东西了吧，应该是加强pET42的表现， 例如换一个promoter比较强的plasmid 如果连另外三个的表现量也不高，那考量一下换别只表现蛋白的comptant cell，不一定 用BL21可以用GOLD BL21或者像你现在正在做的，去改培养条件、加IPTG等来增加表现量。 --

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