作者abbyyam (ㄟ逼)
看板Biotech
标题[求救] Western internal control 老是搞不定
时间Wed Jul 1 15:22:36 2009
各位日安
最近做western遇到个怪问题
就是有某一株细胞的internal control老是标很高(很黑的意思)
但是在做western 之前我已经有测过浓度了
也都调成一样的量我才denature跟load gel的
但是不知道为什麽他的internal control就是非常黑
b-actin 跟 GAPGH都一样
并且transfer完染胶看protein 量也都差不多
甚至我把protein少load 了一些相对起来还是一样比较强
而且少load protein後无论是由染胶或是从membrane的一些杂band看
都发现的确protein都有明显的比较少
这样即使我故意把protein量调很少让他internal control一样多
其他target protein的量表现多还少我都不太敢相信了...
到底该怎麽解决这问题呢???
麻烦大家了> <
谢谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.247.100
1F：→ lssunti:抗体太强? 07/01 15:45
似乎不是，和另一细胞株(HT1376)有瞒明显的差异(有疑问的cel line是RT4)
另外补充一下他是和我其他sample同一类型和organ的cancer cell line
都是human的，不同的地方应一个是从男生来的一个从女生来的 (有差吗?= =")
还有这两株癌细胞的grade不同
大致上是如此
※ 编辑: abbyyam 来自: 203.64.247.100 (07/01 17:09)
2F：→ blence:你的internal control是b-actin,GAPDH? 反正你都定量了,如 07/01 18:31
3F：→ blence:果还需要control,不见得要这些常用的,例如你看癌化,可以拿 07/01 18:33
4F：→ blence:免疫,膜蛋白,代谢相关,或隔壁实验室不同领域的抗体都可试试 07/01 18:34
5F：→ blence:或者某支Ab常会出现的non-specific band也行,不用太坚持 07/01 18:39
6F：推 cocoon121:有没有可能 该系包经由刺激後 反而不能用一般的当? 07/02 01:28
7F：→ cocoon121:我看过有人报告过 某细胞因为怎样的处理後 GAPDH不准 07/02 01:28
8F：→ cocoon121:然後必须要用到TUBULIN才可以 (抗体名称是举例) 07/02 01:29
9F：→ abbyyam:好的~感谢大家的意见~我先换种抗体试试!! 07/02 13:56