※ 引述《wenhaoshen (wenhaoshen)》之铭言： : 我有一个问题，就是我要收细胞分泌到medium的x152蛋白质， : 经过用含10%FBS medium培养CHO-K1三天後, : 收集起来,并用0.22 um filter过滤及浓缩後, : 拿去跑western, 结果跑胶造成旁边的maker严重变形变很细, : 而且size不准, : 而且有些抗体hybrid结果都没有出来 : 我是推断是serum造成的, : 但是无法用无serum的medium去养CHO细胞, : 因为细胞这样会死掉, : 请问有经验的学长姐该如何解决呢? 看了你两篇文章，总觉得你的实验设计都怪怪的~~ 首先，你必须在培养时把血清降到最低，或是在要收之前换成serum free的medium， 应该不会那麽快就死给你看~ 要收supernatant还用到10% serum那有收跟没收是一样的~因为到时你收下来的东西 绝大多数都是serum里的蛋白质~~ 还有啊，我看不懂你过0.22是要干嘛，做western又不需要无菌，用collen concentrate 後就可以冻存或是直接测浓度、处理跑胶了啊~分片段浓缩时就会loss不少了，之前还 跑0.22过滤会让你更大量的loss~~ marker变形跑掉表示你的sample蛋白质太多或是你的SDS-PAGE浓度配太高、跑太快~都有 可能。 抗体HY不出来的确有可能是SERUM造成，可能就是没跑开一大砣把它盖住了，抗体当然 找不到目标罗。 先去掉你的serum的影响，然後尽量的去调整你concentrate的蛋白大小片段，尽量排掉 其他没用的部分，然後再去试，跑western时smaple浓度不要太高，不要有空well（load 空sample loading dye）不要跑太快、调整sds-page浓度……等，你的这个实验有 很多需要改进的地方。 --

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