※ 引述《takumatw (那粒台风)》之铭言： : 我是第一次做ELISA 附近没人做对这实验的样貌不清楚,kit是之前实验室的人留下的, : 行踪不明 : 所以我想问一些很基本的问题 : 我使用的是HUMAN TNF-a ELISA kit (pierce) : 细胞是U937 悬浮型 加药treatment後测 TNF-a : 1.TNF-a 是应该要存在於细胞上清液中吗??如果是,我应该用什麽离心条件取得上清液 : 300xg 5min ??? 理论上是存在细胞上清液没错，可以把整个96-well plate拿去离 只要确定可以把细胞离下来就ok吧 但要小心别把细胞离破XD 300g 5min 可以吧 : 2.每一种sample要做2重覆,这2重覆应该是指同时准备2盘同样的细胞加同样浓度的药 : 分别取1次上清液共(2个sample)??这样说对吗???还是同一细胞上清液取2次就好? 我通常是做三重复耶，重复是指在同一盘plate上进行，三重复就是做3个well，收三个 well的上清液 : 3.根据说明书,应该是它附的96well plate上有coat 某种东西抓得住sample的TNF a : 再以biotinlated antibody抓TNF a 再以Streptavidin-HRP Reagent抓biotin最後以 : TMB呈色 : 我这样对这原理的理解有误吗??? 噢...原理部分请其他人补充吧^^ : 4.大家在wash well之後,是怎麽把washing buffer 抽出来,直接倒掉再甩一甩吗?? 我是直接到掉甩一甩0.0 : 5.我怎麽知道实验准不准确或成功??? 看你标准曲线做的如何 然後每个三重复结果是否相近 标准曲线没做好就白做了~ : 6.如果plate用完了,但是buffer还有,plate通常有得卖吗???因为我不熟悉这实验 : 暂不考虑自己coating 印象中好像都是整套在卖 没在单卖coating好的plate 不过这也是两三年前的事了 不知道现在有没有 :P : 谢谢大家,还请有做过的回我一下!!!! --

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