※ 引述《jabawork29 (气定神闲)》之铭言： : ※ 引述《leoblack (朋友看太重的猫)》之铭言： : : (day) : : 种细胞 4 3 2 1 测MTT : : └-----┴----┴----┴----┴----┘ : :假设 A组 ------------------------------> 红线是seeding後就一直养着的原medium : 假设 B组 ------------------------------> 黄线才是加入了待测的药物 : : C ------------------------------> : : D ------------------------------> : 各组间 各养两盘细胞 养到你要的时间 就收其中一盘细胞 计算细胞数 : 而另一盘就加你想使用之药物浓度所作用的细胞数 : 这样你可以掌控到当时的细胞数 : 不知道这样有没有回答到你的问题? 首先先感谢大家热烈的回应~^^" 我还是来说明一下我的实验好了 我的实验是要测试不同浓度的glucose(Glc)对细胞的影响 实验中,会用serum-free + 不同浓度的glc的medium来养细胞 (已有许多篇paper都是用serum-free的medium来做这实验的 所以可以不用argue这个condition了) 此外~我们会再加入刺激signaling用的ligand 当然还会加入soluble receptor来当competitor 所以 我所用的medium有 serum-free serum-free +10%FBS serum-free Glc 20mM Glc 40mM medium medium medium medium 共4种medium 再搭配上 +ligand +ligand +solvent +competitor +competitor only only 也是4种condition 在不同时间点(1,2,3,4,5,6,7 day)分别去做MTT Day1 (day2~7以此类推) FBS Ligand Ligand+competitor solvant only competitor only serum-free Ligand Ligand+competitor solvant only competitor only sereum-free Ligand Glc 20mM Ligand+competitor solvant only competitor serum-free Ligand Glc 40mM Ligand+competitor solvant only competitor only 共有这样的组别 由於收的时间很长~牵扯到cell doubling time的问题 且~也考量到96-well中~细胞的满度问题~ 以及,这中间过程中~是否需要换新的condition medium?会了是否会有增幅效应? (因为此ligand所induce出来的signaling T1/2还没有paper报导) 不过後来讨论的结果是~把不同天的各自养一盘, 且同时有一起做正常medium(即含FBS)以及serum-free这两种condition 所以就不用额外去考量细胞数的问题了 不论是一起先换condition medium,不同时间收 还是不同时间下condition medium,同一时间收 都还有个基准值在可以来比较~ 不过~这样子~还是没有解决 1.细胞满盘 2.是否需要更换condition medium 的问题~^^" 有人有更好的建议嘛?! 以上~ --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.93.165 ※ 编辑: leoblack 来自: 192.192.93.165 (06/08 14:30) ※ 编辑: leoblack 来自: 192.192.93.165 (06/08 14:37)