各位好 不好意思.. 是一个课业上的问题..但是是星期五结束的讨论.很想要知道各位是怎麽做的 还请各位包涵 我们拿到一张sequence定序的图.还有wild type的sequence，应该是patient的sample 然後是已知有问题的sequence，然後就是要我们找到位置.。然後看混淆的sequence 定序区，然後identify是那一种mutation 定序用的方法应该是sangers sequencing 主要就是混淆的sequence中眼睛看确认那个地方是什麽polymorphism然後再比对 1.请问一下..如果我这样做，我怎麽知道那个mutant是从那一股的DNA定到的? 当时实验课很赶，所以我只稍微问了一下助教，助教是说一跟wild type比就知道 我实际用DNAMAN比一比是把跟wild type比较像的放到同一股上 但是这样不是会有一个问题：在不知道是什麽mutation, inversion, deletion, insertion的情况下，怎麽知道定序上两个peak代表的nucleotide是在那一股上? 2.在看sequence时，大家都是全部输进电脑里做multiple alignment然後看吗? 还是说都用眼睛看呢? 3.一些mutation像是deletion, addition或site mutation可以在multiple alignment 後看得出来，但是像是inversion, frameshift等mutation 有algorithm可以看得出来吗? 4.另外一个有关定序的问题想要问一下，在爬文之後发现就是一般要定序都会做TA cloning 像这种时候送定序就直接送吗?不需要给厂商vector的种类跟做cloning用的切位吗? 好像有些情况也是PCR product确定是single band後也可以定序 像这两种，如果厂商不需要vector的种类，或只是PCR product 要怎麽选primer呢?如何才能定到? 谢谢各位 --

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