各位大大安安: PI最近给我一个任务 要我culture "cerebullum of new born mice" 他应该是要培养神经细胞 之後要用electroporation 把DNA送进神经里面...... 但是我之前完全没有primary culture cell的经验 所以想跟大家请教几个我查不到答案~ 还有不大确定答案的问题 1.因为我第一次做,很不熟练, 所以一开始花了很多时间(大约要半小时/per mice@@) 在取出小脑,去掉脑膜,显微镜下切成小块这些步骤.... 不知道我花这麽久的时间,会不会让细胞死了一大半??(我再切的时候 细胞是放在culture medium之中....medium 是依照protocol配置的) 如果我做太久会导致细胞大量死掉的话,有没有其他方法可以补救? (没办法我ㄧ开始真的是手残不协调...我也很想快点弄完) 2.切完之後,因为没有马上要culture,所以依照protocol上面的叙述 把他们cryopreserve...冷冻在-70(加DMSO)....但是因为我一次要 牺牲五六只老鼠,cryoperserve box又不够,所以我每做完一只 是放在冰里面,等全部的sample都弄完了再一起放进-70 上次我ㄧ共花了三个小时才做完全部><(五只)...请问 这样子细胞会死光吗??还有~我问我们那边的博士後~他跟我说 (他是日本人)在他们那边,他们神经细胞不冰-70度, 都是马上culture起来,因为神经细胞冰起来很容易死掉 就算是放了DMSO也一样...但是因为paper上面是写可以冰起来 我又查不道这方面的资讯..所以想要确认一下哪个才是对的>//< 3.paper上面是写可以culture 28天以上.... 想要请教大家, new born的神经,在培养的时候,他的数量(生长)会增加吗? 还是他只能分化?最多可以培养多久(或几代??)有没有什麽特别要注意的~ 以增加存活率?...因为到时候要electroporation...怕细胞不够到时候 全没了@@ 4.跟细胞培养无关的问题@@ 我有爬文 但是还是想问问.....关於新生mice mark的问题 带我的老师要我剪小鼠的脚趾.....有一些小鼠 会养超过半年....当他们长大之後 我要把它们抓起来~肚子朝上才能看脚趾 但是我有一点恐惧症~我敢抓尾巴,但是不敢抓他们的neck 所以现在正在练习怎麽把它们抓起来check 他们的脚趾 我的情况还蛮严重的 每次一碰到他们的脖子我都会有退缩反射 目前还不成功~我正在努力克服 但是可能需要一段时间 ~所以想要请教大家 有没有其他mark的方法 可以持续半年 又适合我目前的情况??(只要编号一到五) (如果可以的话有没有方法可以编号1到99@@??) 我是个新手菜鸟 这方面的知识我还不大懂~希望大大能够教教我~或是给我ㄧ个指引 各诉我哪边可以习得相关知识.... 先谢谢大家的帮忙了........感恩~^^ --

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