请问有人有经验从"animal tissue"萃取nuclear protein吗? 之前我都是从cultured cells做protein fractionation，结果都还不错 现在换处理tissue後用另一个protocol <--但是我做了都失败 以前做细胞时破膜後都可以用显微镜观察到群聚的核 而做组织就不行，乱七八糟的 以下是我从组织萃核蛋白的方式，请帮我看看可能哪里有问题 1. 把组织切碎 (小鼠肝组织) 2. 加入0.25M sucrose buffer後用Teflon homogenizer破膜 (转速1000/min，戳10次) 3. 过mesh (pore size 200uM) 4. 离心600g, 10 min -->取上清液为cytosolic fraction 5. 接下来是用uncontinuous gradient sucrose buffer 离心 但是我做到3後在显微镜下观察细胞核就看不太到 第4步离心後还有pellte，到後面gradient sucrose 离心就没pellet了 我取的组织量约100mg cytosol fraction有拿去测浓度，很正常 不知道中间这几步是哪里要改善呢 或是有其他不错的protocol呢? (网路上查到几乎都是kit，还是说真的换成kit好?! @_@) 谢谢! -- 芦苇作成的风笛啊 捉弄着森林中单独行走的人呢 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 134.160.214.36