作者marsexarch (游走诗人)
看板Biotech
标题[求救] 测量活性及浓度问题
时间Mon May 4 16:26:10 2009
上回我听实验室前辈的测量方法如下:
1.蛋白质浓度测定
试剂2ml+ 0.5ml sample最後得到OD值
前辈跟我说蛋白质浓度因为被稀释到2.5ml(也就是从0.5稀释2.5)
所以真实的浓度要除回来算出0.5ml真实浓度。我觉得这样说法很合理
但另外一个人告诉我说:直接算2.5ml浓度就好,他认为假设浓度很低可
以忽略。不晓得我该采用哪套方法才正确,基本上我认为最前面的讲法
算出真实浓度比较合逻辑
example
试剂+sample OD540 = 0.435 假设相对浓度320mg/L,因为被稀释所以算回
"原始浓度320X5=1600mg/L"
这样算法是对的吗?
2.另外计算活性activity的问题,假设我拿一个试剂稀释0.05g加入溶剂稀释到30ml
接着取1ml加入9ml另外溶剂中,最後取0.9ml跟酵素0.1ml反应於2ml反应tube中
则试剂浓度最後达到0.15g/L。
接着计算 U (Activity) = micro mole/min
取0.1ml enzyme 要计算1ml单位分钟内反应活性
所以 从OD换算出来的值假设 32micro-mole X 10(换算成1ml)/10mins = 32U
觉得逻辑上合理但想问这边的专家这样算法是否正确?
还是有瑕疵的地方需要补救
谢谢各位高人专家指导~~
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