poly-L-lysine是PC12贴附的关键步骤 只不过coating我们是用开盖放在laminar flow照uv到全乾 其他大概跟asophisca差不多 参考一下罗!! ※ 引述《asophisca (小潘)》之铭言： : 因为我自己现在也在养这一株细胞 : 之前也有发生过这样的状况，还以为是我细胞没有冻好>.< : 所以提供你一些方法参考看看噜 : 1.我养细胞的plate都会先用100 μg/ml poly-L-lysine hydrobromide solution : (Sigma, no. P6282)coating过，时间是60min，37度。这个很多paper上都有用 : 蛮常见的。coating过以後细胞不太会掉，还不错。至於你用的collagen，我也有用 : 只是我是用於要分化的状态的细胞，就是接着在刚刚的PLL後面再coating一层， : 10 μg/ml rat tail collagen Type I (Sigma, no. C3867)。这个要先用PBS去稀释 : ，RT放120min即可。 : 2.刚解冻的细胞要拿出来放到plate养的时候，记得一定要用大孔径的、 : 至少5ml的吸管去吸，因为我之前就是什麽都注意到了，但是这个没注意 : 刚解冻的细胞是很脆弱低。 : 3.冻细胞用全FBS去冻，ATCC的建议没有这样写，不过我家的博士建议我这麽做 : 效果也确实很好。(当然也要内含7%DMSO，这就不赘述了） : 4.细胞刚种下去的时候，不要一直去看它。可以的话隔天在去看，又或是至少要格 : 个半天，不然贴附的黄金时间过了，真的会很难贴。 : 5.冻细胞的DMSO要用最高级culture的，对细胞没毒性，可以隔天贴附好了再换Media : 也ok。 : 以上这几点是我实验上的实作心得，希望对你有帮助。 : 也期望其他更厉害的专家不另指教！！感谢罗！！ -- 时间不停的走 而创作写下历史 --

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