作者wlmweev (早上醒来爬格子)
看板Biotech
标题[求救] serum starvation对於A10大鼠平滑肌细胞株
时间Fri Apr 24 18:38:37 2009
大家好!我目前的实验所采取的细胞是 A10 大鼠平滑肌胞株
本实验室学姊说给药前要 serum starvation 24 小时 让细胞停止生长
可是我自己做了几次後发现 serum starvation 仅仅 3 小时後
原本贴得好好的肌肉细胞很多都浮起来死了...而且还蛮多的
更何况是 24 小时  ̄⊿ ̄||| (在显微镜下看起来浮起来一大堆)
再加上给药24小时,共48小时 serum starvation (在显微镜下看起来,只剩10%还贴着吧)
是不是这个因素导致我想要看的蛋白质在每次 Western blot 的结果看来都不一致
而且我自己偷偷做了 serum starvation 的 time course
发现在48小时内,仅仅 serum starvation 的情况下
我想要看的蛋白质的表现量就一直在变化,时多时少 ....
所以如果我想要看一个药物对於 A10 的某蛋白质表现量
serum starvation 这个前处理是不是没有必要做,以免因此屏蔽了药物的作用
(或是变成要看该药物的另一种作用 = =)
还是我的 medium 要含有 1% or 5% FBS,而不是 0%
其实我自己也试了在没有 serum starvation 的情况下给药
不过似乎就看不到药物对该蛋白质的影响 = =|||
我自己查文献的结果,发现要看这个蛋白质的细胞实验,也是有 serum starvation
虽然给的药物不同,但是文献上的 Western blot 结果图的control组都很淡
不像我做的...有时深有时浅
虽然说使用的细胞株不同啦...但真的很奇怪
老板又一直再 murmur....真的快疯掉了
麻烦版友给些宝贵的意见,感激不尽
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 192.192.93.47
1F:推 humwang:可以试试看hormonal defined serum free medium 04/24 20:25
2F:→ humwang:例如加入Insulin-transferrin-selenium, 外带0.5% FBS 04/24 20:25
3F:→ humwang:我的MSC也不喜欢serum free, 但是用这个protocol 04/24 20:26
4F:→ humwang:他们都长得头好又壮壮的... 04/24 20:26