作者lenti (啄木鸟)
看板Biotech
标题Re: [求救] IHC 不太顺利
时间Wed Apr 1 20:06:23 2009
※ 引述《YuDavid (讨厌失眠)》之铭言：
: autoclave的时候 泡着真的会脱落 昨天我就没有泡着
: 只是放在潮湿的buffer的铁盒子里拿去autoclave
: 当然 都没有做出来 哀
: 後来我用微波炉加热到沸 再把slide泡进去 过一分钟後拿出
: 再把buffer微波到沸 循环了七八分钟左右
: 也是没有很成功ˊˋ
脱落的问题, 我们曾经有试过不同厂牌的玻片,
DAKO Silanized Slides (Silane Coating) Code No. S3003
的玻片是耐得起煮沸而不容易脱落的, 如果可以就从切吧.(可以跟永吉订)
另外, 还有其他的 Antigen retrival 的方法可用.
你可试试其他类的buffer, 因为sodium citrate虽然常用, 但很多时候signal会太弱.
1.For Citrate: Bring slides to a boil in 10 mM sodium citrate buffer pH 6.0
then maintain at a sub-boiling temperature for 10 minutes. Cool slides on
bench top for 30 minutes.
2.For EDTA: Bring slides to a boil in 1 mM EDTA pH 8.0 followed by 15
minutes at a sub-boiling temperature. No cooling is necessary.
3.For TE: Bring slides to a boil in 10 mM TE/1 mM EDTA/0.05% Tween-20, pH
9.0 then maintain at a sub-boiling temperature for 18 minutes. Cool on the
bench for 30 minutes.
4.For Pepsin: Digest for 10 minutes at 37°C.
: :
: 抗体是学姊给的 好像是他自己纯化出来以前拿去做western用的
: 我在跟他讨论看看
: 我们都没做过IHC@@
: 但是我想 抗体应该不会有问题吧@@
能做WB的抗体, 不见得能做IHC,所以一定要有Positive control.
说不定跟本就是抗体的问题.
啊, 你学姐是怎样, 没手没脚哦, 要data是不会自己做哦~, 只会压榨学弟妹吗？嗟~
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◆ From: 140.112.125.66
1F：推 YuDavid:其时也不能怪学姊啦 他自己也没做过 不过说真的 目前为 04/02 03:02
2F：→ YuDavid:为止 学姊也几乎没有带我们做甚麽实验 大部份自己摸索 囧 04/02 03:03