作者leondemon (狗狗)
看板Biotech
标题[闲聊] FLAG/HA/His/MYC tag的比较
时间Tue Mar 31 17:11:02 2009
常见的peptide tag有FLAG/HA/His/MYC tag这几种
我google了一下 鲜少有人做出这四种的比较图....
之前上课有听老师说His tag纯化或是Western会比较脏 FLAG效果比较好
但学姐却说FLAG很脏 His tag比较好
请问有人对这几种tag有比较明确的了解吗？
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.13
1F：推 turtle24:抗体的品质比较重要 03/31 17:49
2F：→ tsubasawolfy:有些东西是怎麽洗也会残留的...万恶的HSP跟Actin.. 03/31 18:12
3F：推 bluecsky:做出来脏不脏跟你抗体品质还有你洗的操作这些比较有关 03/31 22:35
4F：推 leoblack:flag很脏?!flag抗体好到1:50K都还染得出来~效果超好~ 04/01 18:40
5F：→ leoblack:不过his到目前为止还没用过乾净的就是了~^^" 04/01 18:41
6F：→ leondemon:我说的脏是背景很脏～ 04/01 21:39
7F：推 blence:这里面都要用抗体辨识tag做纯化,除了His,它通常用Ni-NTA等 04/01 22:00
8F：→ blence:离子抓polyHis,而很少用抗体做,因此His特异性不够高容易脏 04/01 22:02
9F：推 leoblack:我的意思就是指,说flag会脏~是不是抗体浓度太高了?! 04/02 00:35
10F：推 tsubasawolfy:不懂背景很脏是啥意思..IP的脏是指non-specific吧? 04/02 08:14
11F：推 tsubasawolfy:western做出背景黑黑的那是western技术问题 04/02 08:16
12F：推 leoblack:楼上~有些抗体的specificity真的比较差,所以背景会脏~ 04/02 11:05
13F：→ leoblack:同张membrane不同抗体hytbrid,背景值就会不同~ 04/02 11:06
14F：推 tsubasawolfy:现在的Flag不是都指定sigma M2嘛- -a 04/02 11:36
15F：推 leoblack:推楼上~sigmaM2好用又乾净~会脏就是WB作太差或Ab浓度太高 04/02 11:48
16F：推 snowypuppy:我们家试过FLAG/HA/Myc..结果发现跟接的construct有关 04/07 01:11
17F：→ snowypuppy:并没有一定的定论...要测试!!有的接Flag好 有的接myc好 04/07 01:12
18F：推 bigcat24:若同是pcDNA3接myc-His or V5-His V5认的比较好 04/07 10:40