作者ng0529 (花非花)
看板Biotech
标题Re: [求救] 请问detect protein trimer的方法
时间Tue Mar 31 13:08:35 2009
※ 引述《officium (officium)》之铭言：
: 如题 请问该如何做比较好呢
: 查了paper 有人就是induce protein变成trimer後直接跑SDS page
: 好奇怪阿这样不会denature然後变成一条bend吗?
: 还是说我的loading dye里面就别加DTT之类的东西啦 @@??!
: 实验室的人是告诉我跑netive gel
: 请问protein的带电要多负跑netive gel才跑的下来? = =??!
: 以上 这两种方法真的可以用吗 那哪种比较好
: 请问还有别的方法嘛
: 还有大家是用哪套系统查online protocol的呀
: 感觉突然看到跑tri 脑袋空空都生不出来方法
: 谢啦谢啦 :)
整个觉得你不是很了解PAGE，
你该从NATIVE PAGE(不管是胶还是buffer类都不加SDS) 样品也不加热
基本上你分子量多大我不清楚，
最好设定running buffer pH>pI (通常8已经几乎大过所有)
因为做低%PAGE，我会不作集胶~我实验室做到4%胶，
(我家pentamoer蛋白质115kDa左右 由五个monomer组成)
理论上你三个带电荷会比一个多
加上低%PAGE孔洞加大~分子量影响变小，电荷多的会跑比较快
还有SDS DTT功能 不一定只会denature一个功用
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※ 编辑: ng0529 来自: 163.23.211.175 (03/31 13:27)