作者lenti (啄木鸟)
看板Biotech
标题Re: [求救] 关於histone的western blot
时间Fri Mar 20 17:55:19 2009
※ 引述《stool (要死了)》之铭言：
: 最近想要用histone来当我实验一部分的positive control
: 我是用whole cell lysate来跑western
: 然後用anti-histone的antibody去测 (anti-H3)
: 可是做了几次都超乾净什麽band都没有
: (cell: 293T lysate量大概是20ug/lane)
: 因为我之前没有用过
: 想请问一下histone需要先做purification再测吗?
: 我在想我测不到的原因是antibody的问题还是histone的量本来就很少
: 直接用cell lysate测不到
: (应该不会是western的问题因为我同时有其它sample都有signal)
: 谢谢
histone 是可以用whole cell lysate直接跑, 可以不用纯化处理.
我有直接用cell lysate 做过, 而且我是WB, H3, Ac-H3, Ac-H4, H3K9me2,
modification量会比total histone的量更少, 所以你压histone H3 是没问题的.
可能是抗体的问题.
你可以把loading protein 加到 40 ug 试试.
要注意histone 的size 约 17 kDa 左右,
记得用 12% ~ 15% SDS-PAGE 去run.
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.66
1F：推 qqqpig:请问哪家的抗体较好? 03/21 02:55
2F：→ lenti:Upstate (进阶); Cellsignaling (细胞科技/诺贝尔) 03/21 03:42
3F：→ qqqpig:多谢! 03/21 14:34
4F：推 stool:thanks! 03/21 17:02
5F：推 humwang:signal 若是不强的话, 也许可以考虑用super signal ECL 03/21 22:11
6F：→ humwang:2nd antibody可以换用Jackson, 这是我用过最好的2nd Ab 03/21 22:11
7F：推 leoblack:推楼上~Jackson的Ab真的好用!!! 03/21 23:41
8F：推 tsubasawolfy:Jackson的2Ab买一次可以用好久... 03/22 11:08