看板Biotech
标 题Re: [求救] 细胞培养
发信站批踢踢参 (Wed Mar 4 08:18:57 2009)
转信站ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!ptt3
因为不晓得你做的细节
所以只能给你大概的建议
可以考虑一下下面的状况
1) 请问你的 Western blot 有没有 internal control 呢?
像是 Actin, tubulin, GAPDH, etc
Cell lysate 的蛋白质定量有时不是很准确
Bradford 会受到 Detergent 的影响
Lowry 的灵敏度差
不加 Detergent 的话 lysate 往往不均匀
所以用个 internal control 来确定定量上的大致准确度
Target 也可以用这个来标准化
2) 请问你期待的差异有多大呢?
Western Blot 定量并不容易准确
所以如果差异在 10 % 左右的话....改用别种方法吧XD
Western Blot 有几点要注意
如果是用 HRP-ECL 呈色的话
ECL 不平均会造成差异
讯号太强会无法定量,而且会消耗 ECL 太快的话反而没讯号
3) 你给的药会不会在 critical treshold 附近?
那一点点的 loading error 就会造成极大的变异喔
计数细胞倒不必要
除非你对蛋白质定量产生极大的怀疑 XD
Normalize 选对方法就好
--
※ 发信站: 批踢踢参(ptt3.cc)
◆ From: 91.3.238.25