※ 引述《Asialin ( )》之铭言： : 这个不太可能 : 虽然没有染过神经 : 不过就我用ABC system的经验是没碰过在细胞核有non-specific binding : 通常ABC system会有的非专一性染色问题 : 是在肝脏或肾脏等有大量endogenous biotin的场合 : 一抗有时也是非专一性共染的元凶 : 建议你做一个normal IgG的negative control : 这样你至少可以厘清可能是哪个步骤出了问题 重新叙述问题... 冷冻切片的组织是有perfusion过的背根神经节 PBS wash都是5~10 min X3 H2O2 → Blocking(goat serum) → anti-G-CSFR → FITC antibody ↓ biotinated antibody → ABC → DAB 萤光的结果 明明是一样的细胞 但却有亮度不一的问题 即使两个抗体都隔夜或二抗浓度增加并隔夜 亮度不一的问题依旧 但并没有不专一的情形出现 即anti-G-CSFR专一性没问题 染ABC-DAB则会出现明显的不专一染色 Schwann cell/satellite cells不该出现 但却极端明显... 测试ABC乱来的可能性... 略过biotinated antibody 结果组织完全没染上色 代表ABC没问题 测试biotinated antibody乱来的可能性 略过anti-G-CSFR 组织很淡并没有离谱上色 代表biotinated antibody也没问题 Q1: 这样看起来primary/secondary antibody 和ABC都没有问题 那是哪里有问题? Q2: 萤光亮度不一的问题如何解决? -- 疼只疼，这考试，通宵不济 疼只疼，这题目，艰涩难解 痛只痛，这分数，一去不返 痛只痛，这学分，离我远去... --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.93.37 ※ 编辑: Rodrigo 来自: 192.192.93.37 (02/26 20:23)