你的步骤有些奇怪, 第6步. 我纯化完之後, 只用NaOH 处理, 37度, 15 min. 不会再加入 Na-Bisulfite. 然後, 加2.5 Vol 99.9% EtOH, 进行酒精沉淀的步骤. 我用的protocol是参考这篇 Methods 27 (2002): 134-138. Screening for and analysis of ..... 这篇所介绍的方法把modification的流程缩短到5小时. DNA 纯化之後再处理NaOH，当然是有目的的且是很重要的步骤. 这个步骤是desulfurization. 前面用Na-bisufite对DNA进行modification, DNA 纯化之後, 这个修饰并未改变, 因此最後才需要NaOH处理, 置换掉S.以 利之後的PCR. This NaOH treatment is to remove the bisulfite adduct from the uracil ring. It is important that this desulphonation step is complete. 而加 Hydroquinone 的目的是保护 DNA 在 depurination过程中不会 strand breakage. ※ 引述《ken0123 ()》之铭言： : 1. DNA用 2MNaOH 在37℃处理 10min : 2. 加入250μl(1.5M)的NaS2O5与30μl(10m)的hydroquinone : 3. 放入热水浴中50℃、16~18小时 : 4. 使用promega DNA clean-up kit进行纯化 : 5. 加入50μl(0.6N)的NaOH静置五分钟 : 6. 加入10μ的NaS2O5与500μl(100％)的酒精 : 7. 放在-20℃中静置20分钟 : 8. 以12000rpm离心20分钟，倒去上清液 : 9. 加入500μl(75％)的酒精，以12000rpm离心15分钟，接着进行抽气 : 10.加入50μl的ddH2O放置在37℃下1小时回溶DNA : 以上大概步骤是这样 : 我想请问有做过甲基化的大大 : 为什麽DNA经过纯化之後还要在经过NaOH处理呢? : 这个是有什麽特别的目的吗? : 另外,hydroquinone加在NaS2O5里面的目的是什麽啊?? : 希望有好心人士可以帮我解答! : 感激不尽~ --

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