※ 引述《cattailizu (眼睛一眯眯)》之铭言： : 对不起 问这个问题有点蠢 : 因为一直抽同学的血来做实验 对他很不好意思 : 以下有几个问题，希望有经验的人可以帮忙回答一下 : 1.PBMC算是初代细胞吗? : 之前有去上过细胞培养的课里 : 老师有说 有些初代细胞可以继代个4-8代，甚至有的细胞可以到12代 : 不知道有没有人养过PBMC继代的 或者是有哪些方法可以让他增生或是活久一点 : 假设用不含任何营养物质的RPMI-1640养的话 : 大约可以活多久呢? PBMC算是primary cell PBMC是由monocyte, lymphocyte组成 通常来说，在一般的环境下(RPMI-1640 10%FBS)培养下 monocyte(贴附在dish底部)可以活比较久，大约ㄧ两个星期没问题 lymphocyte(漂浮在medium中)存活时间比较短，可能只有一个星期左右 要让PBMC增生的方法有很多 例如用 PHA 刺激lymphocyte活化 你就可以拿到大量增生的lymphocyte 不过这个方法已经让lymphocyte〝活化〞了 可能要视您的实验目的而有所斟酌 : 2.计数的问题 : 因为是抽同学的血 一个人大约10-14mL : 可是用细球计数器总觉得不到2*10次方的细胞(/mL) : 这样的数目是合理的吗? 这里的〝计数〞有点问题 以正常人而言，1uL的全血中大约有4000-10000颗白血球 换句话说，浓度大约在 4 ~ 10 x 10^6/mL monocyte约占周边血液白血球的10%左右 lymphocyte较多，大概占30~40% 因此，假设您是拿 10 mL 的全血取PBMC(约占白血球的50%)计数 应有 2~5 x 10^7个细胞 : 计数的时候 连小粒的细胞也要数吗 : 我主要是数比较大颗的?这样做法是不是不对阿 这个问题牵涉到血球的型态学 有时候会因为分离的技术不纯熟、或是试剂、温度的问题 导致分离的PBMC不够纯 这时候可能会参杂一些红血球、血小板或是嗜中性白血球 前面两种血球的大小明显比较小，所以应该蛮好区分的 比较麻烦的是嗜中性白血球的混杂 建议你可以改用Turk染色法(染细胞核) 可以分出单核(PBMC)与多核(嗜中性白血球)的差异 可以帮助你更准确地计算PBMC : 3.看paper里有人会加10%的FBS在RPMI-1640里去养(但也有人不加) : 因为ELISA会因为血清的存在或是脂质会影响分析结果 : 所以目前不太赶加FBS 但是分析IL-4跟IFN-r结果都怪怪的 : 会是因为不加FBS把血球们饿死的原因吗? : 以上希望有经验的大大给我点建议 : 谢谢你们 以不含FBS的medium培养lymphocyte 基本上就是在诱发 lymphocyte发生apoptosis (serum starvation) 如果只是短期应该还可以 要长期观察或是培养就不建议了 以上是小弟的一点心得 可以请有经验的版友帮忙指正，谢谢 -- 我不想在球场上当一个没用的人 也许我真得不是很厉害 再练下去也只有这样子... 可是.......我就是会认真地去练习 赌赌看明天会不会变强一点... --

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