作者satantaco (笨蛋TACO)
看板Biotech
标题[求救] 要在target上接一个retriction site
时间Wed Feb 11 00:18:05 2009
因为作clone的需要 所以我要在target序列的前面多加一个限制脢切位
我想到的作法是 因为模板是genomic DNA所以 我的forward primer可以设计成如以下
ATG以後是target 5'-.....ACTTGG ACCGCT ATGGGGCC.....-3'
假设我要加进去的site为TAGGAA primer=>acttgg TAGGAA atggggcc
如此做pcr把site接进去
那我想问的是 我是否可以先设计跟原始序列相同的primer把target先p出来
再用加了切位的primer做secondary PCR 如以下
target序列 5'-ATGGGGCC....-3'
forward primer=> TAGGAAatggggcc....
这样p是否能将切位加上去 或者不行 麻烦大大们解答一下
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◆ From: 59.112.6.180
1F：推 chvkimo:我的经验是可以,但是应该可以直接就使用 新的primer去夹 02/11 02:17
2F：→ chvkimo:genomic DNA 就好了 02/11 02:17
3F：推 Ice9:用 acttggTAGGAAATGGGGGCC 这条夹就好了。PCR後纯化可立刻切 02/11 02:23
4F：推 J0HAN:同上两位 为什麽要多此一举呢？不是很懂你的用意 02/11 06:01
5F：→ satantaco:因为个人另外想如果模板是cDNA的话 是否可以用第二种 02/11 09:36
6F：→ satantaco:方法XD 感谢大家噜 02/11 09:36
7F：推 CWChang1221:你的第二条primer有5个mer和原始序列不同, 算多了, 分 02/13 23:13
8F：→ CWChang1221:两阶段夹比较不会夹出太多的杂讯, 另外要用cDNA或者 02/13 23:14
9F：→ CWChang1221:genomic DNA 要看你要夹的地方有没有 intron 来决定 02/13 23:16