※ 引述《sweetapril (sweetapril)》之铭言： : 想请问大家在做western时, : 1. 同一批sample会压几次呢?? (所谓的2重复 3重复是什麽意思呢?跟n值一样吗) : 若"第一次"所压的5管sample就有想看的趋势了,大家还会将这5管sample再压一次吗? : 还是再重新收另一批sample来增加 n 值呢? 当然是重新收一批 : 2. 一抗的部份,如果overnight超过48小时,对蛋白表现会有不好的影响吗? : 以 Rho A 为例,之前试过O/N 16小时 --- 影像不明显 (一抗1:500, 二抗1:5000) : O/N 24-36小时--影像较清晰了(一抗1:500, 二抗1:5000) 我不清楚Rho A好不好压 但是有些proteins真的不好压.可能GAPDH非常强,压几秒就够了 但是proteins却压到几个小时,连加强版都拿出来用 : 3. 如果要跑分子量20-26kd,制15%的胶会比较好吗?? : 我现在都跑12%的胶,但因为要看的分子量下方有一条很近的杂band, : 跑到跳海了,还是没办法分的很开 = =/// 嗯...建议你跑15% 但是15%比较不容易跑漂亮 : 4. 低分子量时,通常transfer的 伏特数和时间 是用多少呢? : (Rho A--24kd-- 我用100V,60分钟,这样会太少or太久吗?) : 谢谢^^ --

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