作者LIAR (堕天使)
看板Biotech
标题[求救] western blot时,duplication亮度差很多
时间Fri Feb 6 23:23:16 2009
我一次跑四片胶,两组sample,二重复。
第一次压的p-ERK看起来,二重复的差异还不会很严重:
http://myhome.ethome.com.tw/liar2000/090206_p-ERK_M.jpg
压完後会stripping,再看GAP-43
http://myhome.ethome.com.tw/liar2000/090206_GAP-43_M.jpg
从上面往下看膜,1,4相同,2,3相同,包括顺序和量都一样。
(不过有一两个lanes因为sample不足而空在那。)
结果上面两张的GAP-43亮度竟然几乎没了,明明所有的membrane都是一起操作的,
包括blockink,ab,wash,stripping,前一个p-ERK看起来还差不多,(甚至上面两张
还亮一点)结现在上面两张突然暗掉,下面的duplication却暴亮?
请问这是什麽原因呢?我在blocking、一抗和wash时都有注意所有的膜没有黏在一起。
何况我也没听过膜靠太近会有这种状况,所以我想破头都想不到好的解释,请各位
前辈帮我抓一下问题好吗?
另外就是我semi-dry transfer时,是先摆好所有的膜後,再从上到下的顺序放gel的,
不晓得是不是乔位置乔太久让後面已经摆上的膜乾掉,所以下面两张扭曲的很严重....
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太初有道,道与耶和华同在,道就是耶和华。这道太初与耶和华同在。
万物乃藉祂所造,凡被造的没有一样不是藉着祂所造的。生命在祂里头,
这生命就是人的光。光照在黑暗里,黑暗却不接受光。
吾辈乃生於黑暗,行於黑暗。因神之指引,行向光明;又因撒旦诱惑,回归黑暗。
我不断地徘徊於光明与黑暗之间,从被造之日至今,又自今直到那审判之日的来临。
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◆ From: 123.192.22.47