作者xareelee (XareeLee)
看板Biotech
标题[求救] TRIzol抽RNA时 想要去除DNA
时间Mon Jan 19 21:12:59 2009
以前有用TRIzol抽过RNA 都是酒精沈淀回溶後 测完OD才加入DNase I
可是最近想要简化流程（省时间并减少RNA损失） 又想要确保没有DNA残留
不知道下面步骤能不能使用？ 请大家看看提供一下意见？
1.将菌液离心後，使菌块溶解於TRIzol(1 mL)当中，充分均质并放置15 min
2.加入chloroform(0.2 mL)後，混合均匀并放置5 min
3.离心後小心吸取上层的上清液（约540 uL)
4.加入DNase I(量可能要抓） <====新增步骤
5.重新phenol/chloroform和离心取上清去除protein <====新增步骤
6.isopropanol沈淀RNA，离心取得RNA pellet
7.用75% ethanol清洗，离心後乾燥RNA pellet
8.回溶於DEPC-treated water，测OD260&280
9.RNA gel确定RNA品质，同时进行RT取得cDNA进行保存。
这样应该可以确保没有gDNA残留，并且可以加快实验步骤
这样可行嘛？
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◆ From: 140.129.77.13
※ 编辑: xareelee 来自: 140.129.77.13 (01/19 21:14)
1F：推 Ice9:嗯，看样子，你们 Lab 应该挺有钱的。DNase，我们一般不在那 01/19 23:03
2F：→ Ice9:时候加...... 01/19 23:03
3F：推 sharkcell:恩~这样做应该要加比原本多快10倍的DNase量吧 01/19 23:11
4F：推 hek:你第四步DNAse就死光啦,怎麽去的掉 01/19 23:13
5F：推 untilnow:DNase:干！ 01/20 00:24
6F：→ sunnyting:楼上...囧... 01/20 09:45
7F：推 sunnyting:1>2>3>6>7>8+确认品质>4>再测一次OD>合成cDNA 01/20 09:52
8F：→ sunnyting:DNase用量请参考说明书 一定量的sample+一定量的DNase 01/20 09:53
9F：→ sunnyting:我也是抽植物 用量在0.5~1 micro-g之间 01/20 09:55
10F：推 sunnyting:还有 不见得每次都要用DNase 你可以跑个PCR检查一下有无 01/20 09:57
11F：→ sunnyting:genomic DNA残留 因为若要microarry的就不能加DNase 01/20 09:58
12F：→ sunnyting:又打错字....microarray囧 01/20 09:59
13F：推 zoom8080:第3步牺牲一些 不要抽太靠近分层的地方就OK 01/20 10:19
14F：推 choroplast:依照我们实验室的protocol 第三步的时候 只取400ul 01/20 17:58
15F：→ choroplast:而且在取的时候 尽量不要吸到中间的白色沈淀物 01/20 18:00
16F：→ xareelee:所以说 正常的TRIzol抽取 不会有genomic DNA残留罗？ 01/21 15:58
17F：推 zoom8080:加氯仿离完新以後要避免晃到 这样水层应该不会有DNA 01/22 03:21
18F：推 Ice9:不是不会留有 DNA 残留，而是其量可以减少很多很多。 01/22 18:58