作者theessential (...)
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标题Re: [求救] 关於protein purification
时间Tue Jan 13 02:33:14 2009
先谢谢pupuwu与liuse的回答~^^"
resin是reuse的, 不过每次通完後会用strip buffer洗掉Ni
Strip buffer配方如下:
400mM EDTA, 2M NaCl, 80mM Tris-HCl, pH7.9
菌量是100ml induction後离心下来的
离心完後直接加binding buffer打散 破菌
经过水洗与binding buffer equilibrate後加入sample
resin的含量约0.8ml
Wash buffer的配方为
20mM imidazole, 0.5M NaCl, 20mM Tris-HCl, 6M urea, pH7.9
用wash buffer洗前会先用binding buffer再洗一次
之後就elute了
elute buffer配方
1M imidazole, 0.5M NaCl, 20mM Tris-HCl, 6M urea, pH7.9
因为有把未loading的sample与通column後得到的flow through拿去跑PAGE
发现所欲得protein量几乎都差不多
所以想大概是binding的问题比较高
谢谢大家的帮忙
上一篇漏讲了一些细节 不好意思
谢谢!
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◆ From: 140.129.62.101
※ 编辑: theessential 来自: 140.129.62.101 (01/13 02:35)
1F：推 shunwang:reused resin 应该是有 recharge Ni 01/13 21:51