作者pearls (越自由越寂寞)
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标题[求救] 用western blot测核内NF-kB的表现
时间Fri Jan 9 23:06:19 2009
有一个小小的实验技术问题想请教大家:
一般测NF-kB会用western blot或EMSA
目前要做的是western blot测核内NF-kB表现
然而自己在收细胞时产生一个问题
就是所用的Lysis buffer似乎测不到核内的NF-kB表现
做出来的结果是刺激之後，NF-kB反而减少
(但我想看的是核内要增加，才跟paper的结果吻合)
但是实验在细胞lysis下来後，还会经过粉碎
困扰的是，时间跟刺激量都跟paper的一样，结果却相反
是否测核内的NF-kB需要特别的处理?
因为实验室的方式似乎是测到细胞质的表现，是离心後取上清液
(也就是细胞质的NF-kB减少，进入核内了)
不知道有没有人用western blot测过核内的NF-kB，怎麽测到核内表现而非细胞质?
另外要看核内的表现，在收细胞时有什麽要注意的事?(难道不能只取上清液吗?)
谢谢大家~~
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◆ From: 140.136.61.225
1F：推 aceliang:我看过的paper是用luciferase assay做 01/09 23:41
2F：推 tsubasawolfy:抽核蛋白做不就知道了.... 01/09 23:49
3F：推 jbking:推nuclear protein 01/10 00:05
4F：推 EsMirada:抽nuclear fraction 01/10 14:33
5F：推 liuse:用hypotonic buffer配合低速离心去掉cytoplasm 01/11 00:31
6F：推 cecik:做protein fractionation，同时收cytosolic和nuclear来分析 01/14 08:20