作者artery (酸糖果)
看板Biotech
标题[求救] Q-PCR
时间Sun Dec 21 01:01:07 2008
最近在做Q-PCR碰到一些问题，请大家帮忙，谢谢
问题一：
我把磨好的RNA转成cDNA後
先用一般PCR拿actin当primer
来先确认我的RNA有没有问题
结果：只有single band
又我的sample是有转基因跟没有转基因的植物
所以我又拿我转基因的primer去pcr
确定没有转基因没有band，而有转基因的植物有band
并且都是single band
所以接下来我就直接拿这些sample当template
来进行Q-PCR
看结果是有萤光被侦测到(有被放大)
但是NTC和sample被放大的倍数是一样的
然後melting curve非常专一(包括NTC都有起来)
然後跑胶之後
NTC是空的
但sample的部份全都smear
请问 这是怎麽一回事？
是不是我的sample有DNA污染？
还是......？
问题二：
我设计一组A gene的primer，预期要p到的大小为200bp
所以我先用一般的pcr进行测试
但不论怎麽p，提高温度还是什麽的
p到的长度都是450bp左右，并且是single band
但一样的产物，换另一组B gene当primer进行PCR
得到的结果和预期的大小是一样的
再换另一组不同的C gene，也和预期大小一样
请问，A gene那组的primer发生什麽问题？
还是那里出了问题？
麻烦线上的高手们帮忙解答
这实验卡了也一阵子了
我想快毕业走人
就剩这个实验了
请大家帮忙，谢谢
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3F：→ artery:有做negative control都没问题 12/24 11:56