作者infinityrain (我是可怜虫>_<...)
看板Biotech
标题Re: [求救] DNA定序的厂商
时间Fri Dec 12 23:17:29 2008
借个标题问一下,
我想板上应该有人有做过fusion protein,
而fusion protein的核酸长度应该也大多不算短,
像我现在在做的总长大约就有1900bp.
但有个问题是,我请厂商(源资)帮我从两头定序,
回来的结果头尾顶多只有700bp~800bp的可信,
虽然定序的的讯号有到900bp啦,但太後面的peak看来就不可靠,
而且,就算我头尾都定,这两端的信号也没overlap,
中间的base就不知到底有没有对.
因此我想问各位有做过长片段fusion protein的,
你们在clone完後应该也会送定序吧?那有什麽方法可以确认中段base的正确性呢?
是要另外再设计primer让厂商可以从中间定序?
还是说有厂商可以提供长片段的核酸定序服务?
还是,只看头尾,中间就不理他了!?
(不过我想应该不会是这个吧>_<)
另外再问一下,polymerase
(如Taq)在进行PCR时,
是否会有愈尾端错误愈多的情形,还是说错误的发生是很平均分布的呢?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.64.79.241
1F：推 hek:多订一条primer去定序中间的部分. 12/12 23:25
2F：推 owl628:多订一条primer请厂商定中间的序列 12/12 23:29
3F：推 a64toto:多订两条primer去定序中间的部分 12/13 11:18
4F：推 witchs:做fusion protein...最好用pfu 12/13 14:22