作者arzakiii (Duke. Bio)
看板Biotech
标题Re: [求救] cloning的问题
时间Fri Dec 12 13:28:15 2008
※ 引述《nidus (咕叽)》之铭言：
: 实验流程大略如下：
: ligation以及图菌後
: 隔天长出colony
: 挑单一colony做cloning PCR
: 检测是否目标基因有接进vector中
: 而我遇到的情况是cloning PCR检测有看到目标基因被放大
: 而我将该菌珠培养O/N後 隔天抽plasmid
: 再做enzyme digestion 结果却切不出那段基因出来
: 而且plasmid的位子好像在空的vector位子
: 送定序出来的结果也很诡异
: ps我利用vector上的CMV30为primer 定序结果不到没有我塞进去的gene
: 序列也跟vector不同
: 请问有人遇到跟我类似的状况吗？？
plasmid用RE切完
跑胶的时候如果看起来只有切出linear form的plasmid
1. 挑出来是伪阳性的colony (这样就没救了 重挑吧)
2. RE可能切不动相同切点 (可以往外再找切点切切看)
我自己做的习惯是一盘会挑5~10个colonies
一起切这样比较快!!
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