作者damyr (趴趴熊)
看板Biotech
标题Re: [求救] cloning的问题
时间Mon Dec 8 13:52:55 2008
※ 引述《nidus (咕叽)》之铭言：
: 实验流程大略如下：
: ligation以及图菌後
: 隔天长出colony
: 挑单一colony做cloning PCR
长出几颗? 有没有可能是Self-ligation?
Competent cells的Copy number跟plasmid的大小可以推算出预期colony数
: 检测是否目标基因有接进vector中
: 而我遇到的情况是cloning PCR检测有看到目标基因被放大
negative control有没有做? 水污染了?
: 而我将该菌珠培养O/N後 隔天抽plasmid
: 再做enzyme digestion 结果却切不出那段基因出来
: 而且plasmid的位子好像在空的vector位子
: 送定序出来的结果也很诡异
: ps我利用vector上的CMV30为primer 定序结果不到没有我塞进去的gene
: 序列也跟vector不同
: 请问有人遇到跟我类似的状况吗？？
这不诡异啊，就是没成功嘛，重做吧
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◆ From: 134.208.23.97
1F：推 aceliang:做cloning的，应该要习惯最後一句话阿XD 12/08 14:02