作者kaifish (喔.....................)
看板Biotech
标题Re: 请问 关於 PRIMER的量
时间Sat Dec 6 12:19:27 2008
※ 引述《DJHINN (dj)》之铭言：
: 如果PRIMER量太过稀的话
: 会夹不出东西吗?
: 例如
: 原本要求
: 50 micro M 要求 1 micro L
: 我配成
: 10 micro M 1 micro L
: = ="
: 结果会差很多吗?
: 我是做 RFLP 的....
那要视您的 PCR总体积为多少 及 使用的酵素 而定
通常PCR的反应体积最大为50 uL
而酵素通常会要求primer的终浓度在一定的范围内
举例而言：Takara Taq要求每条primer的终浓度在 0.2 uM ~ 0.5 uM
a.若为一般50uL的PCR而言
50 uM 取 1uL 则终浓度为 1 uM → 对Takara Taq来说有点过高
10 uM 取 1uL 则终浓度为 0.2 uM
b.可以自行类推不同体积
有时候primer的浓度如果过高，可能会出现大量的primer dimer
过低又可能会影响PCR的效率
因此，建议您先阅读一下酵素的使用说明书
再详细计算一下primer的使用量
另外，只要看到清楚的signal
要进行RFLP应该没有问题
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我不想在球场上当一个没用的人
也许我真得不是很厉害
再练下去也只有这样子...
可是.......我就是会认真地去练习
赌赌看明天会不会变强一点...
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.133.34
1F：推 DJHINN:说明书的建议是50uM 1uL ...以前是没有注意到这环节... 12/06 13:25
2F：→ DJHINN:现在有注意到了...所以我重新配了一管新的MIX 再跑看看看 12/06 13:26
3F：→ DJHINN:等一下就可以知道结果了... 谢谢你的回答啦 12/06 13:26