作者quatre2323 (quatre2323)
看板Biotech
标题[求救] 关於作果蝇的polytene chromosome的压片技巧,救救我啊~~~
时间Thu Nov 20 21:06:54 2008
我最近都在作果蝇的polytene,之後要染色去拍confocal。
可是不管我怎麽压片,染色体就是在核里不出来,
要不然就是出来後,染色体却碎掉了...orz
不知道是不是因为这样,所以抗体染色结果都不均匀。
有的地方超亮,有的地方却很暗。
我压片的方法是:
1.把唾腺取出後放到载玻片,以Triton-X solution作用几分钟,再丢到醋酸中。
2.接着轻放上盖玻片,左手食指母指定住盖玻片,以镊子另一头,轻敲盖玻片。
3.一样用镊子另一头(钝端),横向用力刮盖玻片。
p.s我不知道是不是这个步骤有错,染色体容易碎掉!?
後来也试过用拇指直接按,结果染色体完全没出来..
4.接着就拿去显微镜,先观察压的成果。
5.若有水在流动,用手掌下半部,再用力下压,压到显微镜下没有水流。
p.s不过似乎有时候压到水都没了...乾掉!?=口=
6.然後丢到液态N2几秒钟,存放methanol中,待染色用。
这个实验....杀了上百条的larve了....取唾腺的技巧进步很多,
但压片完全就是惨烈...老师说至少要压到70%以上染色体都出核,才算及格...
求压片高手,救救我啊~~~~有没有什麽撇步可以压的漂亮的????>"<
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