作者healthcircle (Oh......)
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标题[求救]大鼠冠状动脉平滑肌细胞培养及监定问题
时间Wed Nov 19 13:04:40 20
最近养细胞出了一些问题
可以请各位大大帮我看ㄧ下
以下是我的问题
1.大鼠冠状动脉平滑肌细胞primary culture
我是用含有20%FBS DMEM去养它
可是它的生长速率真的很慢
几乎养了五六天 6公分dish还长不满 同ㄧ代放久了还会污染
请问一下这样的情形是正常的吗
有可以让它长快ㄧ点的方法吗
2.平滑肌细胞染色监定
我是用我们家学长姐的方法(他们都说随便染 都会成功 但是我染了3次都失败了)
先用3%福马林固定
再用含有10%FBS跟0.4% Triton X-100的buffer 去打洞和blocking
中间有用PBS wash
最後用PI染核
用monoclonal anti-actin clone AC-40 FITC conjugate(sigma,F3046)
稀释50被去染alpha-actin
请问我的步骤有出什麽问题吗
或需要改进的地方
或者各位大大有其他的protocol可以提供给我吗
麻烦各位大大帮我看ㄧ下
谢谢罗
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.177.199
※ 编辑: healthcircle 来自: 163.15.177.199 (11/19 13:05)
1F：推 zoom8080:一般都是10%福马林或4% paraformaldehyde 11/19 14:29
2F：推 leoblack:印象中,这细胞的培养好像需要外加EGF~才会生长快一点 11/19 15:38
3F：→ leoblack:还是VEGF~总之需要查证~ 11/19 15:39