※ 引述《mitchlai (mitch)》之铭言： : 假设你要进行大象(pyruvate dehydrogenase)之研究,且该之该酵素胺基酸序列及DNA序列 : 均未知,请由网路资料库现有之资讯设计退化性引子,并说明如何应用在PCR方法求得该基 : 因之全长序列. : 我只知道去NCBI的网站找~, 在 search 的栏位选择 gene 这一选项吗? : 那FOR 是要打pyruvate dehydrogenase??还是什麽?接下来又该怎麽做? : 请会的人告诉我~ : 谢谢~感激 1.) gene输入pyruvate dehydrogenase 选取你要的基因，点入。 中间有一栏为Genomic regions，选取你要的Form 点选FASTA，会出现基因序列。 选择NCBI中的BLAST 将FASTA里的序列复制到Primer-BLAST or Primer3网站 点选，电脑就会帮你把Primer设计出来 2.) 将电脑做出的Primer再去和其他Isoform或别的物种的相同基因进行BLAST 因为要的是degenerate primers，我们希望都能抓其他相似基因。 3.) 以上顺利的话，把此段Primer，去抓你未知的DNA序列。 顺利抓到的话，再做Inverse PCR应可知道此基因的序列。 PS 术语尽量用英文，退化性引子我第一次听到。 NCBI中找到的序列，可以取变异性较小的片段来做Primer。 以上是我推论的，可行性不知，有错请指教。 --

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