作者linfourjay (第四节)
看板Biotech
标题[求救] 有关eGFP的vector问题
时间Sun Nov 9 00:13:25 2008
小弟正在读篇有关siRNA相关paper
作者建构了一个vector，有关eGFP以及chimeric intron 我不甚了解。
以下为文中不解之处
The mir-30e precursor (98 bp) (=== 这里是指pre-miRNA构筑在vector内
amplified from the mouse genomic DNA was inserted into
the chimeric intron (36 bp 5' donor and 36 bp 3' acceptor
sequences) of an eGFP gene so that the pre-mir-30e could
be spliced from the eGFP transcript to produce the mir-
30e sister pair.
The remaining eGFP transcript would be
spliced, ligated and translated into eGFP (== 最後eGFP会自己ligate起来!?
小弟不解的是
什麽是chimeric intron (36 bp 5' donor and 36 bp 3' acceptor
sequences) 我推想他的功能可能和intron类似,是之後会被移除的地方，所以意味着
siRNA之後也会被移除出来(因为将siRNA放在chimeric intron内)
但是 36 bp 5' donor and 36 bp 3' acceptor sequences是什麽样的方法可以让
siRNA变成两段小段的sequence!?!?
还是以上我都想错了...
恳请知道的前辈提供想法 <(_ _)>
附上期刊网址 (Fig4 b 有此vector)
http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=2034466
感恩再感恩 。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.229.236.148
1F：推 hek:他先把pre-miRNA放在intron中, intron经由splicing会放出 11/09 12:58
2F：→ hek:pre-miRNA,再经由drosha与dicer作用後形成miRNA,注意这个miRNA 11/09 12:59
3F：→ hek:为双股,但之前认为细胞会选择其中一股作成具功能的miRNA 11/09 13:00
4F：→ hek:这篇paper认为利用分别带有两股miRNA目标序列的luciferase 11/09 13:02
5F：→ hek:结果看到都有抑制现象,因此认为两股miRNA都有作用. 11/09 13:03
6F：推 sGoat:你问题的答案应该在Fig.5里面,搭配supplementary Fig.2 食用 11/09 14:50
7F：→ linfourjay:Orz 叩谢以上大大 11/11 01:55