作者lazyQ (认真过每一天)
看板Biotech
标题[讨论] ligation
时间Fri Nov 7 10:07:40 2008
一般在做ligation时都是vector + insert 去进行反应
如果说现在我有2个insert，把vector + insert 1 +insert 2，加在一起
ligase有办法成功的将这三者接成一个环状的plasmid吗？
(只是想知道这样能否成功，不讨论先接一个insert，再接另一个喔)
(不考虑in frame,cutting site...etc这些问题的话)
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不是我想偷懒啦XD
最近做了一个clone，里面有insert 1和insert 2
下一步是搬到另外一个vector(两端的cutting site是一样的BstXI)
好死不死，insert 1和insert 2中间发生mutation，跑出一个BstXI
这下冏了，我无法用BstXI将 insert1 - insert2 整个搬出来。
原本的规画
vector1: -------BstXI---insert1-----------insert2---BstXI----
mutation後的结果
vector1: -------BstXI---insert1---BstXI---insert2---BstXI----
这样能理解吗？ 我讲得好乱>__<~
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◆ From: 134.208.24.2
※ 编辑: lazyQ 来自: 134.208.24.2 (11/07 10:08)
1F：推 sisyphus:你知道 三架飞机撞在一起的机率有多大吗 11/07 10:55
2F：推 sGoat:你的东西是positional digestion就可以,TA的话注意正反接 11/07 11:04
3F：→ sGoat:也不是不行,但是你要有大量rapid screen的心理准备(百来株吧 11/07 11:05
4F：推 turtle24:不考虑cutting site的话会做到死吧... 11/07 11:20
5F：推 sGoat:抱歉说错,是directional digestion 11/07 11:21
6F：推 micocat:我做过三个接点是不同cutting site的 11/07 12:31
7F：→ micocat:还有二端不同cutting site 中间blunt end 11/07 12:32
8F：→ micocat:老实说我觉的跟一般ligation没什麽不同啊 11/07 12:33
9F：→ micocat:vector切的够乾净的话 挑16颗就可以挑到很多个了 11/07 12:35
10F：推 sGoat:抱歉我百来株是指都是TA的情形,用不同切点是快很多没错 11/07 12:39
11F：推 bolly:为什麽我觉得你想偷懒 11/07 14:10
※ 编辑: lazyQ 来自: 134.208.24.2 (11/07 14:26)
12F：推 sGoat:那个突变是你要的吗?不然重新clone不就没这个问题了? 11/07 16:38
13F：推 stinky:其实推荐用PCR phusion很难有mutation 11/07 21:16
14F：推 bluecsky:等等..都mutation了这样的gene你能用吗?重新clone吧 11/08 11:21
15F：→ bluecsky:phusion是真的满强大的... 11/08 11:22