作者wa478478 (俺真的不是王力宏)
看板Biotech
标题[求救] RNAi and protein 拜托各位了...
时间Thu Oct 30 18:02:21 2008
请问各位大大..
有没有人针对细胞做RNAi之後..
做real time PCR 确定 mRNA的表现量有被抑制下来(效率大概80~90%)
但是做western却没有抑制下来的现象...
理论上不是蛋白质的表现量会下降吗??...
可是看起来怎会没有啥改变??
是我蛋白量用太多吗??(小弟我蛋白跑50ug,大小21KD,跑15%的gel)
还是因为蛋白是膜蛋白,所以蛋白太稳定半生期太长吗??
还是我使用的一抗专一性太差...
还是real time PCR 数据错误?
还是有其他因素?
对了,我所用的细胞是有抗生素挑过的stable colony...
应该不太是因为Cell不纯所导致的...
还是有其他方法(就是不用western的方法)
可以确定蛋白的表现....
小弟已经为了这实验已经纠缠了快一年了..
拜托各位大大了!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.143.99
1F：推 kirry:activity? 10/31 23:08
2F：推 Nikio:用RNAi你这问题常发生耶～你可以去基因体中心RNAi core 11/09 23:49
3F：→ Nikio:看看成果回报，其实很多你的例子，不过我还是觉得要 11/09 23:50
4F：→ Nikio:protein量下降比较让人放心@@..... 11/09 23:50
5F：→ Nikio:还有～我的经验，用RNAi最好是做早期的细胞株，通常养越久 11/09 23:51
6F：→ Nikio:knockdown效果越差～这是真的！本来有KNOCKDOWN 11/09 23:51
7F：→ Nikio:挑了stable clone又养了几代～咦～怎麽跟CONTROL一样了!惊! 11/09 23:52
8F：推 Nikio:不过前几代通常还OK.....恩恩 互相交流一下 我最近也因为 11/09 23:56
9F：→ Nikio:RNAi konckdown效果头大很久@..@ 11/09 23:57