作者pop6234 (表面的和平)
看板Biotech
标题[求救] ligation 的相关问题
时间Fri Oct 24 01:22:32 2008
常见ligation是16度C overnight
不知道有没有人做过室温的ligation
我自己有做过室温15min的ligation
不过因为得到的clone数太多
老师觉得很不真实
觉得室温ligation15min的方法非正统
得到的结果需要被质疑真实性
我们家用的是invitrogen的T4 DNA ligase
有人也有用过这样的方法去做ligation吗
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.171.87.15
1F：推 yaliu:我比较常做4度c overnight...效果挺好的XD 10/24 01:25
2F：推 dankai:室温15min我也觉得有点快~如果要快我们会放37度1hr~但大部 10/24 01:28
3F：→ dankai:份都像一楼~~放4度C overnight 10/24 01:29
4F：→ dankai:对了~你的室温15min 每个clone都有接进去吗!? 有点好奇~ 10/24 01:31
5F：推 h3250sam:我们做TA都是25度1hr 一般的clone这样做也都有出来 10/24 03:05
6F：推 macrophage:NEB T4 ligase,室温一小时,结果OK. 10/24 09:27
7F：推 shunze:有东西出来比较重要吧.现在那个技术不是讲求节省时间 10/24 09:41
8F：推 enisx:之前赶时间的话,室温下 3-4 hr 就transformation了,没问题 10/24 12:33
9F：→ sGoat:酵素一到不都会有标准使用程序吗?怕不准不是可以做对照组? 10/24 14:39
10F：→ sGoat:就一组接insert一组接D2水,或是蓝白筛,抗生素筛,一翻两瞪眼 10/24 14:40
11F：→ sGoat:把结果摊给你老板看不就知道有没有可信度... 10/24 14:40
12F：推 leoblack:切完的vector alone也要一起ligation和涂plate做control 10/24 18:52
13F：→ pop6234:我有做过2次室温15min的 第一次忘记挑几颗(要翻记录本) 10/25 18:59
14F：→ pop6234:但至少挑到了有8成有接进去 10/25 19:00
15F：→ pop6234:第二次挑10颗有9颗有接进去 10/25 19:01
16F：→ pop6234:虽然两次我都有另外做一组 16度C overnight的 10/25 19:02
17F：→ pop6234:但是挑到我要的就没有再从16度C的那组下去挑clone 10/25 19:02
18F：→ pop6234:我有送sequence 先证明这次的clone是正确的 10/25 19:04
19F：→ pop6234:这几天会做实验对照比较 10/25 19:06
20F：推 sGoat:应该不用到定序,就对照跟实验组抽完plasmid用酵素切一刀 10/25 19:48
21F：→ sGoat:跑胶看长度就是一翻两瞪眼了,除非你片段差异很小 10/25 19:49
22F：→ sGoat:而且要是plasmid没接进去东西长度不会变,顶多接到不要的东西 10/25 19:51
23F：→ sGoat:接到不要的东西也是证明可以接东西进去,而不是接不进去 10/25 19:51
24F：→ sGoat:要是有空vector的话拿去切一刀也可以当对照组 10/25 19:53
25F：推 yaliu:说实在的PCR跟RE check或者定序都正确的话，那就是对的 10/25 22:46
26F：→ yaliu:ligation的条件那麽多种，有东西最重要！ 10/25 22:47